Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. Генетический маркер моносомия/делеция 13-й хромосомы – (del(13), -13) образуется вследствие удаления (делеции) части или всей хромосомы. Наличие этого маркера является важной, прогностически значимой, специфической аномалией. При классическом цитогенетическом исследовании делеция, или моносомия, 13q определяется у 15 % больных миеломой, при анализе методом FISH – у 39-54 % первичных больных множественной миеломой и хроническим лимфолейкозом.
Синонимы русские
Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний – хронический лимфолейкоз и множественная миелома.
Синонимы английские
Fluorescent in situ hybridization, molecular diagnostics of oncohematological diseases: chronic lymphocytic leukemia and multiple myeloma.
Метод исследования
Флуоресцентная гибридизация in situ.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Специальной подготовки не требуется.
Преимущества исследования
Общая информация об исследовании:
Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) – молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально он использовался как исследовательский для выявления наличия или отсутствия специфической ДНК-последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической ценности был внедрен в клиническую практику.
Метод основан на использовании флуоресцентномеченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по специфичности: для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).
После специальной процедуры – денатурации молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет определить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это еще и количественный метод.
FISH имеет широкие возможности в клинической онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Метод позволяет исследовать генетический состав клетки как во время митоза, так и в интерфазе. Он имеет высокую чувствительность – позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате может быть использовано несколько зондов с различными красителями.
FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.
Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) характеризуется моноклональной экспансией зрелых В-клеток и крайне гетерогенным клиническим течением, отражающим сложность геномных изменений. Хромосомные аномалии, выявленные с помощью метода флуоресцентной гибридизации in situ (FISH), являются известными прогностическими факторами при ХЛЛ. Среди них – делеция 13q14 [del(13q)], которая обнаруживается более чем в 50 % случаев и связана с хорошим прогнозом при обнаружении ее в качестве единственной аномалии. Однако несколько исследований доказали, что пациенты с делецией 13q14 представляют собой гетерогенную группу. Пациенты с более крупными делециями, включая RB1–ген, а также те, у которых более высокий процент морфологически измененных клеточных ядер, имеют значительно худший клинический прогноз. Хотя возможности традиционных цитогенетических исследований имеют ограничения из-за низкой скорости митоза клеток ХЛЛ в культуре, дополнительные аномалии, выявленные в кариотипе, могут предоставить более точную цитогенетическую информацию, которая может улучшить прогноз. Были описаны транслокации с участием 13q14[t(13q)] и многих других хромосом. Следствием этих геномных перестроек, вероятно, является потеря гена-супрессора опухоли в локусе 13q14.
Множественная миелома (ММ) представляет собой злокачественное новообразование из клональных плазматических клеток, характеризующееся сложной хромосомной нестабильностью. Она включает в себя как числовые, так и структурные аберрации, которые признаны наиболее важными факторами для обеспечения потенциальной прогностической значимости и формирования терапевтических стратегий. Обычные факторы оценки включают в себя делеции 17p (del (17p), t (4; 14) и t (14; 16), обнаруживаемые с помощью флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Существуют доказательства того, что микроРНК играют решающую роль в патогенезе опухолей человека, а также являются ценными маркерами для прогнозирования диагноза, оценки риска и клинических исходов. МикроРНК представляют собой небольшие, приблизительно 18-22-нуклеотидные, некодирующие молекулы РНК, которые отрицательно регулируют посттранскрипционную экспрессию генов путем связывания с 3'-нетранслируемой областью их целевых транскриптов. Кластер miR-15a/16-1, близко расположенный на хромосоме 13q14, обладает сходными опухолевыми супрессорными функциями, участвующими в дифференцировке клеток, пролиферации, апоптозе или ангиогенезе в нескольких опухолях человека, включая ММ. Показано, что понижающая регуляция miR-15a/16-1 способствует прогрессированию миеломы и опосредует лекарственную устойчивость миеломных клеток, ухудшая прогноз течения заболевания.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Кто назначает исследование?
Гематолог, онколог.
Также рекомендуется
[02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)
[02-027] Ретикулоциты
[12-077] Морфологическое исследование трепанобиоптата костного мозга
[16-012] Цитогенетический анализ клеток костного мозга (кариотип)
[18-115] FISH анализ делеции TP53
[18-120] FISH анализ перестроек ATM гена
[18-122] FISH анализ перестроек IGH гена
[18-128] FISH анализ транслокации t(11;14)(q13;q32)
[18-130] FISH анализ транслокации t(14;16)(IGH/MAFB)
[18-132] FISH анализ транслокации t(4;14)(p16;q32)
Литература
