Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. Ген ТР53 является "стражем генома", в его функции входит контроль за целостностью ДНК. Если геном клетки повреждается, ТР53 запускает процессы апоптоза (саморазрушения клетки), в том числе и в кроветворной ткани. Мутации в этом гене приводят к тому, что клетка не разрушается, а продолжает функционирование с нарушенным генотипом. Исследование на наличие мутаций в гене ТР53 крайне важно для диагностики и прогнозирования течения множественной миеломы и хронического лимфолейкоза.
Преимущества исследования
Синонимы русские
Флуоресцентная гибридизация in situ, молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний – хронический лимфолейкоз и множественная миелома.
Синонимы английские
Fluorescent in situ hybridization, molecular diagnostics of oncohematological diseases: chronic lymphocytic leukemia and multiple myeloma.
Метод исследования
Флуоресцентная гибридизация in situ.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Специальной подготовки не требуется.
Общая информация об исследовании
Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) – молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально он использовался как исследовательский для выявления наличия или отсутствия специфической ДНК-последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической ценности был внедрен в клиническую практику.
Метод основан на использовании флуоресцентномеченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по специфичности: для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).
После специальной процедуры – денатурации молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Данное состояние интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет определить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это еще и количественный метод.
FISH имеет широкие возможности в клинической онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Метод позволяет исследовать генетический состав клетки как во время митоза, так и в интерфазе. Он имеет высокую чувствительность – позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате может быть использовано несколько зондов с различными красителями.
FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим фактором для подтверждения диагноза.
Хронический лимфолейкоз характеризуется моноклональной экспансией зрелых В-клеток и крайне гетерогенным клиническим течением, отражающим сложность геномных изменений. Мутационный статус гена-супрессора опухоли TP53 – важный пример этой сложности, поскольку он может изменяться в течение заболевания. Примечательно, что мутационный статус TP53 является как прогностическим, так и фармакопредиктивным фактором, который необходимо оценить до первого лечения и который требуется учитывать в последующем для контроля терапевтического эффекта и оценки вероятности механизмов резистентности. Поскольку изменения в гене TP53 связаны с большинством пациентов, устойчивых к химио- и иммунотерапии, приводя к более короткой выживаемости даже в эпоху новых лекарств, точный анализ мутаций TP53 и делеции соответствующего хромосомного локуса 17p13.1 (del (17p) должны учитываться при первичной диагностике еще до начала лечения. Клиническое течение хронического лимфолейкоза очень неоднородно: от стабильного в течение десятилетий до довольно быстрого прогрессирования, требующего лечения. Пациенты с генетическими аномалиями, включая цитогенетические аберрации и генные мутации (в том числе делеции гена TP53), как правило, имеют плохой прогноз.
Множественная миелома (ММ) представляет собой В‐клеточное новообразование, характеризующееся большой геномной и молекулярной сложностью, что в значительной степени объясняет вариабельность, наблюдаемую во время клинического течения и ответа на лечение. Цитогенетические аномалии остаются наиболее значимыми прогностическими факторами. Делеция хромосомы 17p (del (17p), которая содержит локус гена TP53, присутствует у 8–13 % впервые диагностированных пациентов с ММ и, вероятно, является цитогенетическим изменением, связанным с наиболее неблагоприятным прогнозом, ухудшая выживаемость. Биаллельная инактивация (инактивация обоих аллельных вариантов) гена TP53 встречается менее чем в 1 % случаев и ассоциируется с крайне неблагоприятным прогнозом.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Кто назначает исследование?
Гематолог, онколог.
Также рекомендуется
Литература
