Флуоресцентная гибридизация insitu (FISH) – цитогенетический метод исследования, в процессе которого детектируется наличие и локализация специфических ДНК-последовательностей на хромосомах. На коротком плече 12-й хромосомы (12р) расположены гены, отвечающие за регуляцию процессов клеточного цикла и инициации процессов апоптоза. Все эти процессы крайне важны для нормального развития и функционирования клеток кроветворной системы. Делеция этого участка хромосомы характерна для развития миелодиспластического синдрома с неблагоприятным течением или острого миелобластного лейкоза (ОМЛ). Исследование применяется для диагностики и прогноза течения заболевания.
Преимущества исследования
Синонимы русские
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH), молекулярная диагностика онкогематологических заболеваний (миелодиспластический синдром с неблагоприятным течением, острый миелобластный лейкоз).
Синонимы английские
Fluorescent in situ hybridization (FISH), molecular diagnostics of oncohematological diseases: myelodysplastic syndrome with an unfavorable course or acute myeloid leukemia.
Метод исследования
Флуоресцентная гибридизация in situ.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Костный мозг.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Анализ с помощью флюоресцентной in situ гибридизации (fluorescence in situ hybridization, FISH) – молекулярно‐цитогенетический метод для идентификации генетических аберраций (отклонений от нормы). Изначально данный метод использовался как исследовательский для выявления специфической ДНК-последовательности в хромосомах, но благодаря прогностической ценности был внедрен в клиническую практику.
Метод основан на использовании флуоресцентномеченых ДНК-зондов, которые представляют собой искусственно синтезированные фрагменты ДНК (олигонуклеотиды), последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. ДНК-зонды различаются по составу, специфичности; для каждой хромосомной аномалии используются свои ДНК-зонды. Также зонды различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу (фрагменту хромосомы или гена).
После специальной процедуры денатурации молекула ДНК приобретает вид одноцепочечной нити. ДНК-зонд гибридизуется (связывается) с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа. Это интерпретируется как положительный результат FISH-теста. При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-зонды в ходе реакции "отмываются", что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию.
FISH имеет широкие возможности в клинической онкологии для обнаружения хромосомных аномалий в опухолевых клетках. Метод позволяет исследовать генетический состав клетки как во время митоза, так и в интерфазе. FISH имеет высокую чувствительность – позволяет обнаружить индивидуальные гены, кроме того, в одном препарате может быть использовано несколько зондов с различными красителями.
FISH-анализ широко применяется при лимфопролиферативных заболеваниях, являясь в ряде случаев определяющим для подтверждения диагноза.
Острый миелобластный лейкоз (ОМЛ) признан основным типом лейкоза взрослого и пожилого возраста, на долю которого приходится 80 % случаев в этой возрастной группе. Одни из распространенных хромосомных аберраций при ОМЛ – аберрации в коротком плече хромосомы 12, которые обычно связаны с плохим прогнозом. Аберрации 12p-хромосом включают в себя транслокации, делеции, добавления и дупликации. У пациентов с небольшими 12p-делециями (del(12p) прогноз в целом лучше, чем у других пациентов с 12p-аберрациями с меньшей частотой хромосомных перестроек. Делеции не могут иметь специфических цитогенетических подгрупп или изменений, специфичных для заболевания.
Миелодиспластический синдром (МДС) представляет собой группу миелоидных заболеваний, характеризующихся дефектом костномозгового кроветворения; они вызывают периферические цитопении, рецидивирующие цитогенетические нарушения и переменный риск прогрессирования в острый миелоидный лейкоз. При МДС делеция короткого плеча хромосомы 12 характерная, но редкая аномалия. Как единичная аномалия она была описана у 0,6–5 % пациентов при первоначальном диагнозе и как дополнительная аберрация у 4 %. Изолированная делеция 12-й хромосомы классифицируется как прогностически промежуточный риск рецидива. Del(12p) часто представляет собой очень маленькую интерстициальную делецию с общей удаленной областью между 12p12.2 и 12p13.1. На этом участке расположен ген ETV6 (TEL),который является фактором транскрипции для генов, контролирующих развитие клеток кроветворной ткани, и инактивируется данной делецией.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Кто назначает исследование?
Гематолог, онколог.
Также рекомендуется
[02-043] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с обязательной микроскопией мазка крови)
[02-027] Ретикулоциты
[12-077] Морфологическое исследование трепанобиоптата костного мозга
[16-012] Цитогенетический анализ клеток костного мозга (кариотип)
[18-114] FISH-анализ делеции 20q
[18-117] FISH-анализ перестроек 3q
[18-118] FISH анализ перестроек 5 хромосомы
[18-119] FISH анализ перестроек 7 хромосомы
[18-123] FISH-анализ перестроек MLL гена
Литература
